DAB染色液的使用方法及注意事项

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2018-03-23

DAB染色液用于免疫组化染色，应用在Dako 自动染色系统上。 DAB染色液的使用方法 1.DAB显色液配制 10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3，3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用 2. 显色准备好含有待测蛋白的固相膜：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤。 3.加入适量的DAB显色液，铺满整个固相膜表面（可按比例增减）。 4. 置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，避免光照（暗室操作），直至棕褐色沉淀出现。 5.用镊子夹起固相膜，放进无离子水里清洗。 6.空气中晾干。 7. 拍照记录。 DAB染色液的注意事项 1． DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用； 2．显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用； 3． DAB在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染； 4． DAB有潜在致突变作用，操作时应注意穿戴好防护用具。