牛（Bovine）脱氨基酪氨酸（Desaminotyrosine）ELISA检测试剂盒（竞争法）【产品货号】DM-Cat9893【包装规格】48/96T【用途】本试剂盒用于体外定量检测[样本类型，如：人血清、血浆、组织匀浆等]中的含量。仅供科研使用，不用于临床诊断。【检测原理】试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被检测指标抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的检测指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。1 将抗体包被在酶标板底部，加入待测抗原2 加入酶标二抗放大信号3 捕获抗体和检测抗体分别结合抗原的不同表位，形成“抗体-抗原-抗体”的三明治结构4 加入底物5 酶催化底物显色，吸光度与抗原浓度成正比，适用于大分子抗原的定量检测，如细胞因子、蛋白质等【主要组成成分】组分名称规格数量酶标板96孔（包被抗体）1块标准品[浓度，如：0 ng/mL, 2 ng/mL, 4 ng/mL, 8 ng/mL, 16 ng/mL, 32 ng/mL]6瓶酶标记抗体10mL1瓶底物溶液（TMB）10mL1瓶终止液（2M H₂SO₄）10mL1瓶浓缩洗涤液（20×）50mL1瓶样品稀释液30mL1瓶说明书-1份【储存条件及有效期】试剂盒未开封时，于2-8℃避光保存，有效期为6个月。酶标板需密封保存于2-8℃，避免受潮。【需要准备的器材和试剂】1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱【操作步骤】1. 试剂准备浓缩洗涤液：用蒸馏水或去离子水按1:20稀释（如5mL浓缩洗涤液+95mL水），充分混匀。稀释后的洗涤液在2-8℃可保存1周。标准品：根据说明书要求，用样品稀释液将标准品进行梯度稀释（具体稀释方法见说明书附录）。酶标记抗体：使用前需室温平衡30分钟，若有沉淀，可轻轻混匀。2. 样本处理按照常规方法采集和处理[样本类型]，具体处理步骤如下：血清：全血样本室温静置30分钟，3000rpm离心10分钟，取上清液。血浆：使用抗凝管采集血液，3000rpm离心10分钟，取上清液。组织匀浆：取适量组织，按1:9比例加入PBS（pH7.4），冰浴匀浆，3000rpm离心10分钟，取上清液。样本需在-20℃保存，避免反复冻融，检测前需室温解冻并充分混匀，如有沉淀需再次离心。3.加样将酶标板从铝箔袋中取出，平衡至室温。设标准品孔、样本孔和空白孔。空白孔加50μL样品稀释液，标准品孔分别加50μL不同浓度的标准品，样本孔加50μL待测样本。轻轻震荡混匀，37℃孵育30分钟。4. 洗涤弃去孔内液体，拍干。每孔加入200μL稀释后的洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。5. 加酶标记抗体除空白孔外，每孔加入50μL酶标记抗体。轻轻震荡混匀，37℃孵育30分钟。6. 洗涤同步骤4，洗涤5次。7. 显色每孔加入50μL底物溶液（TMB），轻轻震荡混匀，37℃避光孵育15分钟。8. 终止每孔加入50μL终止液，轻轻震荡混匀，此时蓝色立即变为黄色。9. 测定在终止反应后10分钟内，用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值）。【结果计算】以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用酶标仪自带软件进行曲线拟合。根据样品的OD值，从标准曲线上查出相应的[检测项目名称]浓度。标准曲线绘制示例：标准品浓度（ng/mL）：0, 2, 4, 8, 16, 32对应的OD值：[示例值，如：0.100, 0.250, 0.480, 0.850, 1.400, 2.100]建议采用四参数 logistic 曲线（4-PL）拟合，相关系数R²应≥0.99。【检测方法的局限性】本试剂盒仅供科研使用，结果不能作为临床诊断的唯一依据。样本处理不当可能导致结果偏差，应严格按照说明书操作。高浓度样本可能存在hook效应，建议对OD值异常高的样本进行适当稀释后重新检测。【注意事项】实验前请仔细阅读说明书，严格按照操作步骤进行。所有试剂需在有效期内使用，不同批次的试剂不得混用。操作时需戴手套、口罩，避免试剂接触皮肤和黏膜。TMB底物溶液有潜在致癌性，终止液为强酸，操作时需小心，若不慎接触，立即用大量清水冲洗。实验结束后，废弃物应按照生物安全规定处理。【标准品稀释方法】1. 高浓度标准品（如32 ng/mL）为母液，无需稀释。2. 取50μL 32 ng/mL标准品加入50μL样品稀释液中，混匀，得到16 ng/mL标准品。3. 取50μL 16 ng/mL标准品加入50μL样品稀释液中，混匀，得到8 ng/mL标准品。4. 依次类推，稀释得到4 ng/mL、2 ng/mL标准品。5. 0 ng/mL标准品即为样品稀释液。【东升国际实验服务代测】ELISA实验代测ELISA（酶联免疫吸附实验）代测是科研和临床检测中＊常用的外包服务之一，基于抗原抗体特异性结合原理，可对生物样本中的微量物质进行定量或定性检测。一、按检测靶标类型分类1. 细胞因子与趋化因子类这是科研中需求量＊大的代测类别，主要用于免疫、炎症、肿瘤、心血管等研究白细胞介素家族：IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-17、IL-23 等干扰素家族：IFN-α、IFN-β、IFN-γ肿瘤坏死因子家族：TNF-α、TNF-β、LTA趋化因子家族：CCL2 (MCP-1)、CCL5 (RANTES)、CXCL8 (IL-8)、CXCL10 (IP-10)生长因子家族：EGF、VEGF、FGF、PDGF、TGF-β、NGF、IGF-12. 炎症与免疫相关标志物急性期反应蛋白：CRP、SAA、PCT、纤维蛋白原补体系统：C3、C4、C5a、C1q免疫球蛋白：IgG、IgA、IgM、IgE、IgD 及各亚型免疫细胞表面标志物：sCD4、sCD8、sCD14、sCD1633. 激素与内分泌相关垂体激素：FSH、LH、TSH、GH、PRL、ACTH甲状腺激素：T3、T4、FT3、FT4、TSH性激素：雌二醇 (E2)、孕酮 (P)、睾酮 (T)、雌酮、脱氢表雄酮代谢激素：胰岛素、胰高血糖素、瘦素 (Leptin)、脂联素 (Adiponectin)、抵抗素应激激素：皮质醇、肾上腺素、去甲肾上腺素4. 肿瘤标志物广谱肿瘤标志物：CEA、AFP、CA125、CA19-9、CA15-3、CA72-4器官特异性标志物：PSA (前列腺)、NSE (神经内分泌)、CYFRA21-1 (肺癌)、SCC (鳞状细胞癌)肿瘤相关蛋白：MMP-2、MMP-9、TIMP-1、VEGF、EGFR5. 自身抗体类抗核抗体谱：ANA、抗 ds-DNA、抗 Sm、抗 SSA、抗 SSB类风湿相关：RF、抗 CCP、抗角蛋白抗体血管炎相关：ANCA (c-ANCA、p-ANCA)、抗内皮细胞抗体其他自身抗体：抗甲状腺抗体 (TPOAb、TgAb)、抗胰岛素抗体、抗磷脂抗体6. 心血管疾病相关标志物心肌损伤标志物：cTnI、cTnT、CK-MB、Myoglobin心功能标志物：BNP、NT-proBNP动脉粥样硬化标志物：ox-LDL、Lp-PLA2、hs-CRP、同型半胱氨酸凝血与纤溶：D - 二聚体、FDP、PAI-1、t-PA7. 神经科学相关神经递质：5 - 羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素、乙酰胆碱、γ- 氨基丁酸神经退行性标志物：Aβ1-40、Aβ1-42、Tau 蛋白、磷酸化 Tau 蛋白神经炎症标志物：GFAP、S100B、NSE、MBP8. 其他常见靶标代谢物：葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐病原体抗原 / 抗体：乙肝五项、丙肝抗体、梅毒抗体、HIV 抗体、新冠病毒抗原 / 抗体药物浓度：抗生素、化疗药物、免疫抑制剂血药浓度qPCR实验代测实验四步走：1. 提取RNA → 记得防RNase污染！用Trizol＊稳2.逆转录 → 把RNA变成cDNA，这是关键一步3.上机运行 → 探针法更特异，染料法更便宜4.数据分析 → 用 2^(-ΔΔCt) 公式算相对表达量！ 血泪注意事项：引物Tm值＊好在60-64℃哦！染料法(如SYBR Green)一定要看熔解曲线，排除非特异性扩增！基线和阈值设置别乱调～所有操作都要防核酸酶污染！
牛（Bovine）蓝舌病抗体（BLU-Ab）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9908产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）赤羽病抗体（AK-Ab）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9904产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）口蹄疫非结构蛋白抗体（FMDV-NSP）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9902产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）副结核病抗体（Paratuberculosis-Ab）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9899产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体（FMD-NSP Ab）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9895产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）Q热抗体（Q Fever Ab）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9892产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）副结核病（Paratuberculosis）ELISA检测试剂盒该试剂盒仅用于科研实验 产品货号：DM-Cat9891产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。 2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、试剂盒的组成三、ELISA实验所需材料（一）试剂盒本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光） 四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存 五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。 六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
牛（Bovine）肌醇（Inositol）ELISA检测试剂盒产品货号：DM-Cat9889产品规格：48/96TELISA 检测试剂盒的检测原理ELISA 全称酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是目前生物检测领域应用＊广泛的免疫分析技术，该试剂盒仅用于科研检测。其核心总原理是：基于抗原与抗体的特异性免疫识别结合反应，耦合酶对底物的高效催化信号放大效应，将免疫结合的特异性信号转化为可通过酶标仪定量检测的显色 / 光信号；通过固相吸附与洗涤步骤实现结合态与游离态物质的彻底分离，＊终实现对待测物（抗原或抗体）的高特异性、高灵敏度定性与定量检测。一、ELISA 试剂盒的核心基础元件与作用所有 ELISA 试剂盒均围绕四大核心元件构建，是实现检测的基础：固相载体：主流为 96 孔 / 384 孔聚苯乙烯酶标板，可通过疏水作用稳定吸附蛋白类抗原 / 抗体，且不破坏其免疫活性，为免疫反应提供固定的固相界面。免疫核心试剂：包被用捕获抗原 / 抗体、酶标记的检测抗原 / 抗体（酶标结合物）。基于抗原表位与抗体互补决定区（CDR）的特异性结合，是保证检测特异性的核心，可＊大程度避免交叉反应。酶 - 底物信号系统：＊常用辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）。酶分子具备极高的催化效率，一个酶分子可在短时间内催化大量底物分子生成有色产物，实现检测信号的级联放大，让 ELISA 可检测 pg/mL 甚至 fg/mL 级别的微量待测物；产物的吸光度（OD 值）与待测物含量存在明确的剂量 - 效应关系，是定量检测的核心依据。封闭与洗涤体系：封闭液（如 BSA、脱脂奶粉）用于覆盖酶标板上未吸附蛋白的空白位点，阻断非特异性结合，降低背景干扰；洗涤液用于彻底分离固相结合的免疫复合物与游离的未结合物质，去除样本杂质和多余试剂，保障检测结果的准确性。二、主流 ELISA 试剂盒的分型检测原理根据检测靶标、分子大小与应用场景的不同，商品化 ELISA 试剂盒主要分为以下 5 种经典类型，其中双抗体夹心法、竞争法、间接法为市场主流。1. 双抗体夹心法（大分子抗原检测＊＊，＊主流）核心适用场景：检测具有至少 2 个独立抗原表位的大分子物质，如细胞因子（IL-6、TNF-α 等）、蛋白类肿瘤标志物、病原微生物结构蛋白、抗体药物等。核心原理步骤：包被固化：将针对待测抗原的特异性捕获抗体固定于酶标板孔内，洗涤去除未结合的多余抗体，封闭空白位点。抗原捕获：加入待测样本 / 标准品，样本中的待测抗原与固相捕获抗体特异性结合，形成 “捕获抗体 - 待测抗原” 复合物，洗涤去除未结合的样本杂质。夹心结合：加入针对待测抗原另一独立表位的酶标记检测抗体，与复合物中的抗原结合，形成 “捕获抗体 - 待测抗原 - 酶标检测抗体” 的双抗体夹心结构，洗涤去除未结合的酶标抗体。显色定量：加入酶对应底物，酶催化底物发生显色反应；终止反应后，通过酶标仪测定 OD 值。显色深浅（OD 值）与样本中待测抗原的含量呈正相关，通过标准品绘制的浓度 - OD 值标准曲线，即可计算出样本中待测抗原的＊＊浓度。2. 竞争法（小分子抗原 / 半抗原检测核心方案）核心适用场景：检测仅含单个抗原表位的小分子半抗原，如激素、农药、兽药、真菌毒素、药物残留、毒品代谢物等，也可用于部分抗体的定量检测。核心原理（抗原包被型，商品化试剂盒＊常用）：包被固化：将待测抗原（或抗原 - 载体偶联物）固定于酶标板孔内，洗涤去除多余包被物，封闭空白位点。竞争性结合：同时加入待测样本与固定剂量的酶标抗体，样本中游离的待测抗原，与固相板上包被的抗原，竞争性结合酶标抗体的有限结合位点。竞争逻辑：样本中待测抗原含量越高，能与固相包被抗原结合的酶标抗体就越少；反之，待测抗原含量越低，结合到固相上的酶标抗体就越多。显色定量：洗涤去除未结合的游离物质后，加入底物显色。OD 值与样本中待测抗原的含量呈负相关，通过标准曲线完成定量检测。3. 间接法（抗体检测金标准方案）核心适用场景：检测样本中的特异性抗体，如病原体感染抗体（乙肝、新冠病毒抗体）、自身免疫抗体、疫苗免疫后的抗体滴度检测、过敏原特异性抗体检测等。核心原理步骤：包被固化：将与待测抗体对应的特异性抗原固定于酶标板孔内，洗涤去除多余抗原，封闭空白位点。一抗结合：加入待测样本，样本中针对包被抗原的特异性抗体（一抗，即待测抗体）与固相抗原特异性结合，形成 “包被抗原 - 待测抗体” 复合物，洗涤去除未结合的杂蛋白与非特异性抗体。二抗结合：加入酶标记的抗种属抗体（二抗，如酶标抗人 IgG 抗体），与复合物中的待测抗体结合，洗涤去除未结合的酶标二抗。显色判定：加入底物显色，OD 值与样本中待测抗体的含量呈正相关，既可通过临界值判定阴阳性（定性），也可通过梯度稀释实现抗体滴度的定量检测。4. 抗体捕获法（IgM 抗体早期感染检测专用）核心适用场景：病原体急性感染的早期 IgM 抗体检测，如急性甲肝、新冠早期感染、优生优育 TORCH IgM 检测等，可有效排除样本中 IgG 抗体的干扰，避免假阳性。核心原理步骤：包被：将抗人 IgM 抗体固定于酶标板孔内，洗涤封闭后，加入待测样本，捕获样本中所有的 IgM 抗体（包括待测特异性 IgM 和非特异性 IgM）。抗原结合：洗涤后加入特异性抗原，仅与捕获到的待测特异性 IgM 结合。酶标检测：加入酶标记的针对该抗原的特异性抗体，与抗原结合，再次洗涤后加入底物显色，OD 值与样本中待测特异性 IgM 抗体含量正相关。5. 直接法（基础原型，极少单独用于商品化试剂盒）核心原理：将抗原包被于固相板，封闭后直接加入酶标记的特异性抗体，抗原抗体结合后洗涤、显色，OD 值与结合的酶标抗体量正相关。特点：操作简单、步骤少、实验周期短；但需为每种检测抗体制备专属酶标物，通用性差、成本高，且非特异性干扰强，仅适用于目标抗原含量较高的快速定性筛查、抗体特异性验证。方法主要检测对象信息与浓度关系适用分子大小典型应用双抗体夹心法抗原（蛋白）正相关（浓度高→色深）大分子（多表位）小分子、半抗原直接法抗原正相关大分子抗原定性、包被验证间接法抗体正相关抗体病毒抗体、自身抗体、免疫滴度竞争法抗原（小分子）负相关（浓度高→色浅）小分子、半抗原类固醇激素、药物、多肽、毒素三、ELISA 技术的核心核心优势原理高特异性：基于抗原 - 抗体的免疫识别反应，仅针对靶标分子的特定表位结合，可＊大程度规避样本中其他物质的交叉干扰。超高灵敏度：酶的级联催化放大效应，可将微量的免疫结合信号放大百万倍，实现常规方法无法检测的超微量物质定量。宽线性定量范围：通过标准品梯度稀释构建标准曲线，可实现多个数量级范围内的＊＊定量，适配不同浓度样本的检测需求。操作标准化、通量高：96 孔板体系可实现批量样本同步检测，操作流程标准化，适配自动化设备，适合临床与大规模筛查场景。四、试剂盒的组成五、样本处理1. 血清样本：采集静脉血后，室温静置2-4小时，3000rpm离心10分钟，收集上层血清，避免溶血，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。2. 血浆样本：使用抗凝管（EDTA、肝素等）采集血液，采集后立即轻轻颠倒混匀，3000rpm离心10分钟，收集上层血浆，-20℃或-80℃保存。3. 组织培养上清：细胞培养完成后，3000rpm离心5分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20℃保存。4. 细胞/组织裂解液：取适量细胞或组织样本，加入预冷的裂解液，冰浴匀浆后，4℃、12000rpm离心15分钟，收集上清液，-80℃保存。5. 所有样本在检测前需恢复至室温，震荡混匀，若有沉淀需再次离心去除，避免影响检测结果。根据样本实际情况，可使用样本稀释液进行适当稀释，确保检测浓度落在标准曲线范围内。六、实验步骤1. 试剂准备：实验前将所有试剂盒组分及样本恢复至室温（25℃左右），浓缩洗涤液用蒸馏水稀释至1×工作液，浓缩检测抗体、链霉亲和素-HRP按说明书比例用样本稀释液稀释至工作液，现配现用。2. 加样：根据实验需求确定所需板条数量，空白孔加入50μL样本稀释液，标准品孔加入50μL不同浓度的标准品工作液，待测样本孔加入50μL处理后的样本（已稀释的样本直接加入，未稀释样本可根据情况用样本稀释液1:1稀释后加入）；随后向所有孔中加入50μL生物素标记检测抗体工作液，轻轻振荡混匀。3. 孵育：盖上封板膜，置于37℃恒温箱中孵育60分钟。4. 洗涤：小心揭开封板膜，甩去孔内液体，每孔加满1×洗涤液，静置30秒后甩去，用吸水纸拍干；重复此洗涤步骤3次，若使用洗板机，洗涤次数可增加1次。5. 加酶：每孔加入80μL链霉亲和素-HRP工作液，轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃孵育30分钟。6. 洗涤：重复步骤4的洗涤操作，彻底去除未结合的酶结合物。7. 显色：每孔依次加入50μL显色液A和50μL显色液B，轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃避光孵育10分钟，此时阳性孔会逐渐呈现蓝色。8. 终止：取出酶标板，迅速向每孔加入50μL终止液，轻轻振荡混匀，蓝色会立即转为黄色。9. 检测：加入终止液后10分钟内，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的OD值（若需校正，可在630nm波长处测定参考OD值，＊终检测OD值=450nm OD值-630nm OD值）。七、结果计算1. 首先计算每个标准品、空白孔及样本孔的平均OD值（复孔检测时），空白孔OD值作为阴性对照，用于扣除背景干扰。2. 以标准品浓度为横坐标（X轴，对数坐标），对应的OD值为纵坐标（Y轴，线性坐标），使用专业绘图软件（如Excel、GraphPad Prism）绘制标准曲线，计算回归方程（R²值应≥0.99，确保标准曲线的可靠性）。3. 将扣除背景后的样本OD值代入回归方程，计算出样本中[检测指标]的初步浓度，再根据样本的稀释倍数计算出样本的实际浓度。（仅供参考）八、试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度如资料所示。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月九、储存与运输1. 试剂盒未开封时，所有组分需密封置于2~8℃冷藏保存，避免冷冻，其中标准品冻干品可置于-20℃长期保存。2. 试剂盒开封后，预包被酶标板需密封防潮保存，剩余试剂需按原储存条件保存，避免反复冻融，开封后建议在1个月内用完。3. 运输过程采用冷链运输（2~8℃），避免高温、剧烈震荡，确保产品性能稳定。十、注意事项实验前请仔细阅读本说明书，严格按照实验步骤操作，确保实验条件（温度、孵育时间）符合要求。所有试剂使用前需充分混匀，但避免剧烈震荡产生大量泡沫，以免影响加样精度。洗涤步骤至关重要，需确保洗涤充分，避免未结合的杂蛋白或酶结合物残留，导致背景值偏高。显色反应需避光进行，终止液加入后应立即检测OD值，避免放置时间过长导致颜色消退，影响检测结果。实验所用样本、试剂及废弃物均需按生物安全规范处理，避免交叉污染。本试剂盒仅用于科研用途，不用于临床诊断。十一、售后服务东升国际-创意平台-注册畅享文化之梦! 拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系东升国际 的技术顾问，东升国际 将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。
牛（Bovine）次黄嘌呤（Hypoxanthine）ELISA检测试剂盒（竞争法）产品货号：DM-Cat9888产品规格：48/96TELISA 检测试剂盒的检测原理ELISA 全称酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是目前生物检测领域应用＊广泛的免疫分析技术，该试剂盒仅用于科研检测。其核心总原理是：基于抗原与抗体的特异性免疫识别结合反应，耦合酶对底物的高效催化信号放大效应，将免疫结合的特异性信号转化为可通过酶标仪定量检测的显色 / 光信号；通过固相吸附与洗涤步骤实现结合态与游离态物质的彻底分离，＊终实现对待测物（抗原或抗体）的高特异性、高灵敏度定性与定量检测。一、ELISA 试剂盒的核心基础元件与作用所有 ELISA 试剂盒均围绕四大核心元件构建，是实现检测的基础：固相载体：主流为 96 孔 / 384 孔聚苯乙烯酶标板，可通过疏水作用稳定吸附蛋白类抗原 / 抗体，且不破坏其免疫活性，为免疫反应提供固定的固相界面。免疫核心试剂：包被用捕获抗原 / 抗体、酶标记的检测抗原 / 抗体（酶标结合物）。基于抗原表位与抗体互补决定区（CDR）的特异性结合，是保证检测特异性的核心，可＊大程度避免交叉反应。酶 - 底物信号系统：＊常用辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）。酶分子具备极高的催化效率，一个酶分子可在短时间内催化大量底物分子生成有色产物，实现检测信号的级联放大，让 ELISA 可检测 pg/mL 甚至 fg/mL 级别的微量待测物；产物的吸光度（OD 值）与待测物含量存在明确的剂量 - 效应关系，是定量检测的核心依据。封闭与洗涤体系：封闭液（如 BSA、脱脂奶粉）用于覆盖酶标板上未吸附蛋白的空白位点，阻断非特异性结合，降低背景干扰；洗涤液用于彻底分离固相结合的免疫复合物与游离的未结合物质，去除样本杂质和多余试剂，保障检测结果的准确性。二、主流 ELISA 试剂盒的分型检测原理根据检测靶标、分子大小与应用场景的不同，商品化 ELISA 试剂盒主要分为以下 5 种经典类型，其中双抗体夹心法、竞争法、间接法为市场主流。1. 双抗体夹心法（大分子抗原检测＊＊，＊主流）核心适用场景：检测具有至少 2 个独立抗原表位的大分子物质，如细胞因子（IL-6、TNF-α 等）、蛋白类肿瘤标志物、病原微生物结构蛋白、抗体药物等。核心原理步骤：包被固化：将针对待测抗原的特异性捕获抗体固定于酶标板孔内，洗涤去除未结合的多余抗体，封闭空白位点。抗原捕获：加入待测样本 / 标准品，样本中的待测抗原与固相捕获抗体特异性结合，形成 “捕获抗体 - 待测抗原” 复合物，洗涤去除未结合的样本杂质。夹心结合：加入针对待测抗原另一独立表位的酶标记检测抗体，与复合物中的抗原结合，形成 “捕获抗体 - 待测抗原 - 酶标检测抗体” 的双抗体夹心结构，洗涤去除未结合的酶标抗体。显色定量：加入酶对应底物，酶催化底物发生显色反应；终止反应后，通过酶标仪测定 OD 值。显色深浅（OD 值）与样本中待测抗原的含量呈正相关，通过标准品绘制的浓度 - OD 值标准曲线，即可计算出样本中待测抗原的＊＊浓度。2. 竞争法（小分子抗原 / 半抗原检测核心方案）核心适用场景：检测仅含单个抗原表位的小分子半抗原，如激素、农药、兽药、真菌毒素、药物残留、毒品代谢物等，也可用于部分抗体的定量检测。核心原理（抗原包被型，商品化试剂盒＊常用）：包被固化：将待测抗原（或抗原 - 载体偶联物）固定于酶标板孔内，洗涤去除多余包被物，封闭空白位点。竞争性结合：同时加入待测样本与固定剂量的酶标抗体，样本中游离的待测抗原，与固相板上包被的抗原，竞争性结合酶标抗体的有限结合位点。竞争逻辑：样本中待测抗原含量越高，能与固相包被抗原结合的酶标抗体就越少；反之，待测抗原含量越低，结合到固相上的酶标抗体就越多。显色定量：洗涤去除未结合的游离物质后，加入底物显色。OD 值与样本中待测抗原的含量呈负相关，通过标准曲线完成定量检测。3. 间接法（抗体检测金标准方案）核心适用场景：检测样本中的特异性抗体，如病原体感染抗体（乙肝、新冠病毒抗体）、自身免疫抗体、疫苗免疫后的抗体滴度检测、过敏原特异性抗体检测等。核心原理步骤：包被固化：将与待测抗体对应的特异性抗原固定于酶标板孔内，洗涤去除多余抗原，封闭空白位点。一抗结合：加入待测样本，样本中针对包被抗原的特异性抗体（一抗，即待测抗体）与固相抗原特异性结合，形成 “包被抗原 - 待测抗体” 复合物，洗涤去除未结合的杂蛋白与非特异性抗体。二抗结合：加入酶标记的抗种属抗体（二抗，如酶标抗人 IgG 抗体），与复合物中的待测抗体结合，洗涤去除未结合的酶标二抗。显色判定：加入底物显色，OD 值与样本中待测抗体的含量呈正相关，既可通过临界值判定阴阳性（定性），也可通过梯度稀释实现抗体滴度的定量检测。4. 抗体捕获法（IgM 抗体早期感染检测专用）核心适用场景：病原体急性感染的早期 IgM 抗体检测，如急性甲肝、新冠早期感染、优生优育 TORCH IgM 检测等，可有效排除样本中 IgG 抗体的干扰，避免假阳性。核心原理步骤：包被：将抗人 IgM 抗体固定于酶标板孔内，洗涤封闭后，加入待测样本，捕获样本中所有的 IgM 抗体（包括待测特异性 IgM 和非特异性 IgM）。抗原结合：洗涤后加入特异性抗原，仅与捕获到的待测特异性 IgM 结合。酶标检测：加入酶标记的针对该抗原的特异性抗体，与抗原结合，再次洗涤后加入底物显色，OD 值与样本中待测特异性 IgM 抗体含量正相关。5. 直接法（基础原型，极少单独用于商品化试剂盒）核心原理：将抗原包被于固相板，封闭后直接加入酶标记的特异性抗体，抗原抗体结合后洗涤、显色，OD 值与结合的酶标抗体量正相关。特点：操作简单、步骤少、实验周期短；但需为每种检测抗体制备专属酶标物，通用性差、成本高，且非特异性干扰强，仅适用于目标抗原含量较高的快速定性筛查、抗体特异性验证。方法主要检测对象信息与浓度关系适用分子大小典型应用双抗体夹心法抗原（蛋白）正相关（浓度高→色深）大分子（多表位）小分子、半抗原直接法抗原正相关大分子抗原定性、包被验证间接法抗体正相关抗体病毒抗体、自身抗体、免疫滴度竞争法抗原（小分子）负相关（浓度高→色浅）小分子、半抗原类固醇激素、药物、多肽、毒素三、ELISA 技术的核心核心优势原理高特异性：基于抗原 - 抗体的免疫识别反应，仅针对靶标分子的特定表位结合，可＊大程度规避样本中其他物质的交叉干扰。超高灵敏度：酶的级联催化放大效应，可将微量的免疫结合信号放大百万倍，实现常规方法无法检测的超微量物质定量。宽线性定量范围：通过标准品梯度稀释构建标准曲线，可实现多个数量级范围内的＊＊定量，适配不同浓度样本的检测需求。操作标准化、通量高：96 孔板体系可实现批量样本同步检测，操作流程标准化，适配自动化设备，适合临床与大规模筛查场景。四、试剂盒的组成五、样本处理1. 血清样本：采集静脉血后，室温静置2-4小时，3000rpm离心10分钟，收集上层血清，避免溶血，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。2. 血浆样本：使用抗凝管（EDTA、肝素等）采集血液，采集后立即轻轻颠倒混匀，3000rpm离心10分钟，收集上层血浆，-20℃或-80℃保存。3. 组织培养上清：细胞培养完成后，3000rpm离心5分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20℃保存。4. 细胞/组织裂解液：取适量细胞或组织样本，加入预冷的裂解液，冰浴匀浆后，4℃、12000rpm离心15分钟，收集上清液，-80℃保存。5. 所有样本在检测前需恢复至室温，震荡混匀，若有沉淀需再次离心去除，避免影响检测结果。根据样本实际情况，可使用样本稀释液进行适当稀释，确保检测浓度落在标准曲线范围内。六、实验步骤1. 试剂准备：实验前将所有试剂盒组分及样本恢复至室温（25℃左右），浓缩洗涤液用蒸馏水稀释至1×工作液，浓缩检测抗体、链霉亲和素-HRP按说明书比例用样本稀释液稀释至工作液，现配现用。2. 加样：根据实验需求确定所需板条数量，空白孔加入50μL样本稀释液，标准品孔加入50μL不同浓度的标准品工作液，待测样本孔加入50μL处理后的样本（已稀释的样本直接加入，未稀释样本可根据情况用样本稀释液1:1稀释后加入）；随后向所有孔中加入50μL生物素标记检测抗体工作液，轻轻振荡混匀。3. 孵育：盖上封板膜，置于37℃恒温箱中孵育60分钟。4. 洗涤：小心揭开封板膜，甩去孔内液体，每孔加满1×洗涤液，静置30秒后甩去，用吸水纸拍干；重复此洗涤步骤3次，若使用洗板机，洗涤次数可增加1次。5. 加酶：每孔加入80μL链霉亲和素-HRP工作液，轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃孵育30分钟。6. 洗涤：重复步骤4的洗涤操作，彻底去除未结合的酶结合物。7. 显色：每孔依次加入50μL显色液A和50μL显色液B，轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃避光孵育10分钟，此时阳性孔会逐渐呈现蓝色。8. 终止：取出酶标板，迅速向每孔加入50μL终止液，轻轻振荡混匀，蓝色会立即转为黄色。9. 检测：加入终止液后10分钟内，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的OD值（若需校正，可在630nm波长处测定参考OD值，＊终检测OD值=450nm OD值-630nm OD值）。七、结果计算1. 首先计算每个标准品、空白孔及样本孔的平均OD值（复孔检测时），空白孔OD值作为阴性对照，用于扣除背景干扰。2. 以标准品浓度为横坐标（X轴，对数坐标），对应的OD值为纵坐标（Y轴，线性坐标），使用专业绘图软件（如Excel、GraphPad Prism）绘制标准曲线，计算回归方程（R²值应≥0.99，确保标准曲线的可靠性）。3. 将扣除背景后的样本OD值代入回归方程，计算出样本中[检测指标]的初步浓度，再根据样本的稀释倍数计算出样本的实际浓度。（仅供参考）八、试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度如资料所示。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月九、储存与运输1. 试剂盒未开封时，所有组分需密封置于2~8℃冷藏保存，避免冷冻，其中标准品冻干品可置于-20℃长期保存。2. 试剂盒开封后，预包被酶标板需密封防潮保存，剩余试剂需按原储存条件保存，避免反复冻融，开封后建议在1个月内用完。3. 运输过程采用冷链运输（2~8℃），避免高温、剧烈震荡，确保产品性能稳定。十、注意事项实验前请仔细阅读本说明书，严格按照实验步骤操作，确保实验条件（温度、孵育时间）符合要求。所有试剂使用前需充分混匀，但避免剧烈震荡产生大量泡沫，以免影响加样精度。洗涤步骤至关重要，需确保洗涤充分，避免未结合的杂蛋白或酶结合物残留，导致背景值偏高。显色反应需避光进行，终止液加入后应立即检测OD值，避免放置时间过长导致颜色消退，影响检测结果。实验所用样本、试剂及废弃物均需按生物安全规范处理，避免交叉污染。本试剂盒仅用于科研用途，不用于临床诊断。十一、售后服务东升国际-创意平台-注册畅享文化之梦! 拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系东升国际 的技术顾问，东升国际 将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。
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